تجزیه و تحلیل PCR چیست؟
تجزیه و تحلیل واکنش زنجیره ای پلیمریزاسیون (PCR) یک روش آزمایشگاهی است که برای تعیین مقادیر کمی از DNA در یک نمونه با یک فرآیند شناخته شده به عنوان تقویت طراحی شده است . در طی تقویت PCR، DNA مورد علاقه بارها و بارها کپی می شود تا آن که برای تجزیه و تحلیل و تشخیص آن کافی باشد. به عنوان مثال، PCR می تواند برای شناسایی مقادیر کمی از DNA از ارگانیسم های که باعث گونوره یا کلامیدیا که در نمونه ادرار وجود دارد استفاده می شود .
PCR چگونه کار می کند؟
مرحله اول در PCR این است که نمونه را حرارت دهیم تا DNA دو رشته جدا شود به دو رشته تک - این نام denaturation نامیده می شود. سپس نمونههای کوتاهی از DNA که تا انتهای دنباله DNA مورد توجه هستند مطابقت دارند، با DNA نمونه ترکیب می شوند. پس از این، DNA پلیمراز برای شروع تکرار DNA در محل آغازگر استفاده می شود. در نهایت، DNA برای جدا کردن رشته ها یکبار دیگر حرارت داده می شود و تمام پروسه PCR دوباره شروع می شود.
مقدار بخش DNA مورد نظر در نمونه، با هر مرحله از PCR، به صورت نمايشی افزایش می یابد: یک نسخه دو برابر می شود، سپس چهار، سپس هشت و غیره می شود. به طور کلی، برای تعیین اینکه آیا DNA موجود در موضوع مورد نظر (و در صورت وجود آن، نمونه ای کافی برای تجزیه و تحلیل) وجود دارد، فقط 20 تا 40 سیکل مورد نیاز است.
تمام مراحل یک واکنش زنجیره ای پلیمریزاسیون - denaturing DNA، استفاده از آغازگرها و کشیدن DNA - در دماهای مختلف اتفاق می افتد، پس پس از مخلوط اولیه با هم قرار داده می شود، مراحل را می توان از طریق یک فرایند شناخته شده به عنوان thermocycling ، که در آن درجه حرارت در سطوح لازم برای مدت زمان کافی برای هر مرحله انجام می شود.
بنابراین، PCR یک روش کارآمد برای تقویت مقدار DNA هدف در یک لوله آزمایشی است که نیازمند نیاز به دخالت انسان است.
واکنش زنجیره ای پلیمراز، زمانی که برای اولین بار در اوایل دهه 1980 توسعه یافت، یک انقلاب در تکنولوژی بیولوژیک بود، و کری مولیس، سازنده PCR، جایزه نوبل شیمی را برای کار خود در سال 1993 به دست آورد.
چرا PCR مربوط به تست STD است؟
واکنش زنجیره ای پلیمریزاسیون و تکنیک های مربوط به آن مانند واکنش زنجیره ای لیگاز نشان دهنده اهمیت روز افزون برای آزمایش STD است. این به این دلیل است که این تکنیک ها می توانند به طور مستقیم مقدار کمی از DNA یا RNA ویروسی را در نمونه ها شناسایی کنند. شناسایی کد ژنتیکی یک پاتوژن نیازی نیست که پاتوژن زنده باشد - مثل کشت باکتری یا کشت ویروسی . این نیز عفونت را به مدت زمان کافی برای افرادی که یک واکنش قابل تشخیص آنتیبادی را ایجاد کرده اند (مثل تشخیص توسط ELISA ) نیاز ندارد. بدین معنی است که تکنیک های PCR گاهی اوقات می توانند بیماری ها را پیش از آزمایش های دیگر تشخیص دهند و بدون به همان اندازه باید نگرانی داشته باشید که زنده نگه داشتن نمونه ها یا آزمایش دقیقا در زمان مناسب باشد.